酵母双杂交系统的原理及其应用
酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid, Y2H）是一种广泛应用于研究蛋白质相互作用的技术。该技术通过利用酵母细胞的遗传特性，检测两种蛋白在体内是否存在直接或间接的相互作用。其核心原理基于转录因子的功能互补性。
在正常情况下，酵母中的GAL4蛋白由两个独立的功能结构域组成：DNA结合域（BD）和激活域（AD）。当这两个结构域分开时，无法激活下游报告基因的表达。然而，如果两种待测蛋白A和B能够相互作用，则它们会将BD和AD拉近到足够接近的距离，从而恢复GAL4的功能，激活特定报告基因（如LacZ或His3）的表达。这种表达变化可以通过显色反应或生长筛选直观地观察到。
酵母双杂交系统的优势在于它可以在活细胞内模拟真实的生理环境，因此可以捕捉到瞬时或弱强度的蛋白质相互作用。此外，该方法具有高灵敏度和可扩展性，能够同时筛选大规模的蛋白互作网络。
为了提高实验结果的准确性，研究者通常会设计对照实验来排除非特异性结合，并通过进一步验证手段确认阳性结果的真实性。酵母双杂交技术已被广泛应用于信号传导通路解析、疾病机制探索以及药物靶点发现等领域，为生命科学研究提供了强有力的工具支持。